文章目录

文题释义：

0引言Introduction

1 材料和方法Materials and methods

1.1 设计

1.2 时间及地点

1.3 材料

    1.3.1 实验动物

    1.3.2 实验试剂

    1.3.3 实验仪器

1.4 方法

    1.4.1 肌源性干细胞的分离与培养

    1.4.2 细胞形态学观察

    1.4.3 CCK-8法检测细胞增殖活性

    1.4.4 细胞免疫荧光鉴定肌源性干细胞

    1.4.5 体外诱导肌源性干细胞去分化及许旺细胞样分化

    1.4.6 Western blot检测特异性蛋白表达

    1.4.7 RT-qPCR检测许旺细胞标志物

1.5 主要观察指标

1.6 统计学分析

2 结果Results

2.1 肌源性干细胞的形态变化

2.3 CCK-8法检测每代肌源性干细胞在不同时间点的增殖活性变化

2.4 睫状神经营养因子诱导肌源性干细胞去分化

2.5 睫状神经营养因子上调了cAMP相关蛋白p-CREB的表达

2.6 FSK-IBMX诱导去分化肌源性干细胞分化为许旺细胞样细胞

2.7 Fsk-IBMX上调了cAMP相关蛋白p-CREB的表达

2.8 生物相容性

3 讨论Discussion

文章摘要:背景:许旺细胞是周围神经组织工程最理想的种子细胞,但许旺细胞存在诸多缺陷,因此目前的研究主要集中在具有许旺细胞特性的其他细胞上,并且许旺细胞样细胞已成为周围神经损伤修复的理想细胞来源。目的:探讨睫状神经营养因子复合毛喉素和3-异丁基-1-甲基黄嘌呤（Fsk-IBMX）诱导肌源性干细胞分化为许旺细胞表型的方法及该诱导过程与环磷酸腺苷信号通路的相关性,以期为进一步将肌源性干细胞应用于周围神经损伤修复奠定基础。方法:采用混合消化酶从1周龄SD乳鼠中提取肌源性干细胞,以睫状神经营养因子诱导肌源性干细胞去分化,再用Fsk-IBMX对去分化肌源性干细胞进行诱导。通过细胞形态学、细胞免疫荧光、CCK-8、Western blot、RT-qPCR等技术对肌源性干细胞、去分化细胞和许旺细胞样细胞进行鉴定及相关分析,同时检测去分化过程和许旺细胞样细胞分化过程中环磷酸腺苷信号通路相关蛋白的表达。结果与结论:（1）细胞免疫荧光染色显示取自SD乳鼠的原代细胞能够被肌源性干细胞特异性标志物Desmin标记;（2）CCK-8结果显示第1-3代肌源性干细胞增殖活性逐渐增加,第3-8代肌源性干细胞增殖活性趋于稳定;（3）Western blot结果显示睫状神经营养因子诱导后成肌分化相关蛋白p21和MyoG表达降低,环磷酸腺苷信号通路相关蛋白p-CREB表达增加,Fsk-IBMX诱导后许旺细胞标志物S100β、GFAP和p75以及p-CREB表达均增加,而环磷酸腺苷抑制剂SQ22536可以抑制睫状神经营养因子和Fsk-IBMX的作用;（4）RT-qPCR结果与Western blot结果一致,即Fsk-IBMX诱导后S100β、GFAP和p75 mRNA表达水平增加,而SQ22536可以抑制这一效应;CCK-8结果显示Fsk-IBMX诱导后细胞活性有所降低;（5）结果显示:睫状神经营养因子复合Fsk-IBMX可以诱导肌源性干细胞分化为许旺细胞表型,并且诱导过程激活了环磷酸腺苷信号通路。

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